Evaluación de la recombinasa reca sobre la unión espermatozoide-ADN exógeno en la transgénesis mediada por espermatozoides en la especie porcina

  • Francisco A. García-Vázquez Universidad de Murcia
  • A. Gutiérrez- Adán Departamento de Reproducción Animal, Madrid
  • J. Gadea Universidad de Murcia
Palabras clave: RecA, recombinasa, transgén, transgénesis, espermatozoide, porcino

Resumen

La transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT) es un método de producción de animales transgénicos. Se basa en la capacidad que presentan los espermatozoides de unir ADN exógeno y transferir el transgénicos a los ovocitos. Por otro lado, la proteína recombinasa de origen bacteriano RecA protege las cadenas simples de ADN de la degradación, al crear una capa protectora. Este hecho da lugar a una mayor producción de embriones viables e integración del transgén en animales producidos mediante microinyección pronuclear e ICSI. El objetivo de este estudio fue investigar la capacidad de transferencia de los complejos RecA:ssADN en espermatozoides de cerdo, así como la viabilidad de los mismos mediante citometría de fl ujo. En primer lugar, se recolectó el semen y se centrifugó para eliminar el plasma seminal. Se utilizó el plásmido EGFP que fue incubado con los espermatozoides a 16º C (grupo control). Para el grupo RecA, en primer lugar se desnaturalizó el ADN (95ºC, 5 min) y seguidamente, se incubó con la proteína RecA en hielo durante 1h, transcurrido este tiempo estos complejos (RecA:ssADN) formados se incubaron con los espermatozoides a 16ºC. La incubación en presencia de la recombinasa RecA supuso un aumento signifi cativo del porcentaje de células unidas al ADN con respecto a espermatozoides intactos incubados únicamente con el gen EGFP (Control: 19.68±0.73% vs. RecA: 24.69±0.70%; p<0.01). Los resultados mostraron que para ambos grupos la unión se produce principalmente a células no viables (Control: 19.21±0.71% vs. RecA: 24.11±0.69%; p<0.01), y en una muy baja relación a espermatozoides viables (Control: 0.47±0.09% vs. RecA: 0.58±0.09%; p=0.40). Con este estudio hemos demostrado que los complejos RecA:ssADN interaccionan con los espermatozoides porcinos en mayor proporción que para el caso de los espermatozoides únicamente incubados con el transgén, y para ambos casos esta asociación se produce principalmente a células no viables. Por lo tanto se podría utilizar la SMGT combinada con técnicas de reproducción asistida como la ICSI para la obtención de embriones y lechones transgénicos.

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Cómo citar
García-Vázquez, F. A., Gutiérrez- Adán, A., & Gadea, J. (1). Evaluación de la recombinasa reca sobre la unión espermatozoide-ADN exógeno en la transgénesis mediada por espermatozoides en la especie porcina. Anales De Veterinaria De Murcia, 25, 59-69. Recuperado a partir de https://revistas.um.es/analesvet/article/view/100181
Sección
Resúmenes de TFG/TFM