Validación de una PCR cuantitativa para la medición de la expression genética de citokinas proinflamatorias e inmunomoduladoras

Autores/as

  • Obdulio García Nicolás Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Murcia University, “Mare Nostrum Excellence Campus – 3738”, 30100 Murcia, Spain
  • Juan José Quereda Spanish National Center of Biotechnology (CSIC), C/Darwin 3, Campus de Cantoblanco, 28049 Madrid, Spain
  • Jaime Gómez Laguna CICAP – Agrifood Research Centre, 14400 Pozoblanco, Córdoba, Spain
  • Irene Magdalena Rodríguez-Gómez Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Cordoba University, Agrifood Campus of International Excellence - CeiA3, 14071 Cordoba, Spain
  • Librado Carrasco Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Cordoba University, Agrifood Campus of International Excellence - CeiA3, 14071 Cordoba, Spain
  • Guillermo Ramis Department of Animal Production, Faculty of Veterinary Medicine, Murcia University, “Mare Nostrum Excellence Campus – 3738”, 30100 Murcia, Spain
  • Francisco José Pallarés Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Murcia University, “Mare Nostrum Excellence Campus – 3738”, 30100 Murcia, Spain
Palabras clave: cerdo, citocinas, PCR cuantitativa, validación

Agencias de apoyo

  • Grant Support: Obdulio García-Nicolás was supported by a doctoral grant from the Spanish Ministry of Economy and Competition (BES-2012-0324508). This work was supported financially by the Spanish Ministry of Economy and Competition, project number AGL2009-12438/GA.

Resumen

La alta sensibilidad y especificidad de la RT-qPCR le hacen el método de elección para la detección precisa de bajas cantidades de ARNm. La mayoría de artículos previamente publicados sobre expresión de citocinas porcinas carecen de información acerca de la validación de la técnica empleada, lo que dificulta su aplicación por nuevos usuarios. El presente estudio se centra en la validación de técnicas de RT-qPCR previamente publicadas para citocinas proinflamatorias (IFN-α, IFN-γ, IL-12p35, IL-12p40 y TNF-α) e inmunomoduladoras (IL-10 y TGF-β). Además se definen las mejores condiciones de amplificación simultánea para qPCR de las citadas citocinas en tejidos porcinos. Los ensayos de RT-qPCR evaluados son sensibles (Eficiencia cercana a 2, coeficiente de correlación mayor de 0.95 y un límite de detección entre 305-100 copias de ARNm), son robustas (coeficiente de variación y factor de discriminación menores de 5 y 3%, respectivamente), y don altamente útiles para el estudio de la respuesta inmune en el cerdo.

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.
Publicado
16-01-2019
Cómo citar
García Nicolás, O., Quereda, J. J., Gómez Laguna, J., Rodríguez-Gómez, I. M., Carrasco, L., Ramis, G., & Pallarés, F. J. (2019). Validación de una PCR cuantitativa para la medición de la expression genética de citokinas proinflamatorias e inmunomoduladoras. Anales de Veterinaria de Murcia, 31, 21–35. Recuperado a partir de https://revistas.um.es/analesvet/article/view/358701
Número
Vol. 31 (2015)
Sección
Trabajos Fin de Grado/Fin de Máster

Las obras que se publican en esta revista están sujetas a los siguientes términos:

1. El Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia (la editorial) conserva los derechos patrimoniales (copyright) de las obras publicadas, y favorece y permite la reutilización de las mismas bajo la licencia de uso indicada en el punto 2.

2. Las obras se publican en la edición electrónica de la revista bajo una licencia Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 España (CC BY-NC-ND 3.0 ES). Se pueden copiar, usar, difundir, transmitir y exponer públicamente, siempre que: i) se cite la autoría y la fuente original de su publicación (revista, editorial y URL de la obra); ii) no se usen para fines comerciales; iii) se mencione la existencia y especificaciones de esta licencia de uso.

Licencia Creative Commons

3. Condiciones de auto-archivo. Se permite y se anima a los autores a difundir electrónicamente las versiones pre-print (versión antes de ser evaluada) y/o post-print (versión evaluada y aceptada para su publicación) de sus obras antes de su publicación, ya que favorece su circulación y difusión más temprana y con ello un posible aumento en su citación y alcance entre la comunidad académica. Color RoMEO: verde.