EVALUACIÓN DE LA INOCUIDAD DEL PROCESO DE SEPARACION ESPERMATICA POR CITOMETRIA DE FLUJO EN EL GANADO PORCINO

Resumen

La preselección del sexo de la descendencia mediante la separación espermática por citometría de flujo implica la tinción de los espermatozoides con el fluorocromo Hoechst 33342 y el impacto sobre éstos de un láser ultravioleta, dos agentes potencialmente mutagénicos. En este trabajo se realizó un estudio de la eficiencia reproductiva obtenida tras la inseminación de cerdas nacidas a partir de espermatozoides separados y no separados (control) con espermatozoides teñidos con Hoechst 33342 y separados por citometría de flujo. Así mismo, se realizo un estudio fenotípico y citogenetico de la descendencia obtenida tras estas inseminaciones. En primer lugar, se evaluó el efecto del procedimiento de separación sobre los parámetros reproductivos. Los análisis citogenéticos se realizaron en metafases linfocitarias procedentes de lechones nacidos tras la inseminación de las cerdas de primera generación con espermatozoides separados y no separados (control). Para ello y tras el cultivo in vitro de sangre procedente de estos animales, se recolectaron los linfocitos por centrifugaron, se lavaron con una solución hipotónica, se fijaron y se prepararon las extensiones en portaobjetos. El número de intercambios de cromátidas hermanas (ICHs) y de aberraciones cromosómicas (ACs, incluyendo roturas cromosómicas y cromatídicas) por célula fueron evaluadas en 50 metafases, pertenecientes al segundo ciclo de replicación celular in vitro, de cada uno de los individuos analizados. Los datos se analizaron mediante ANOVA. Las tasas de partos fueron de un 40% y un 81’2% (p<0.05) en cerdas de primera generación nacidas de espermatozoides separados e inseminadas, a su vez, con espermatozoides separados y no separados respectivamente. Para las cerdas control de esta primera generación, los porcentajes fueron de un 36% y un 82’1% (p<0.05) para espermatozoides separados y no separados respectivamente. No se observaron diferencias entre los grupos para el tamaño de camada. Independientemente del tipo de cerda inseminado, no se observó un aumento significativo (p>0.05) de la frecuencia de ICHs o ACs por célula, en linfocitos pertenecientes a los lechones obtenidos tanto con espermatozoides separados como no separados (segunda generación). Los resultados indican que el proceso de separación por citometría de flujo no posee un efecto mutagénico sobre los espermatozoides de verraco expresado como un aumento en la incidencia de anormalidades en la descendencia obtenida en la segunda generación, así como con un incremento en la frecuencia de ICHs y ACs por célula en linfocitos de estos individuos.