Validación de una PCR cuantitativa para la medición de la expression genética de citokinas proinflamatorias e inmunomoduladoras

  • Obdulio García Nicolás Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Murcia University, “Mare Nostrum Excellence Campus – 3738”, 30100 Murcia, Spain
  • Juan José Quereda Spanish National Center of Biotechnology (CSIC), C/Darwin 3, Campus de Cantoblanco, 28049 Madrid, Spain
  • Jaime Gómez Laguna CICAP – Agrifood Research Centre, 14400 Pozoblanco, Córdoba, Spain
  • Irene Magdalena Rodríguez-Gómez Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Cordoba University, Agrifood Campus of International Excellence - CeiA3, 14071 Cordoba, Spain
  • Librado Carrasco Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Cordoba University, Agrifood Campus of International Excellence - CeiA3, 14071 Cordoba, Spain
  • Guillermo Ramis Department of Animal Production, Faculty of Veterinary Medicine, Murcia University, “Mare Nostrum Excellence Campus – 3738”, 30100 Murcia, Spain
  • Francisco José Pallarés Department of Anatomy and Comparative Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Murcia University, “Mare Nostrum Excellence Campus – 3738”, 30100 Murcia, Spain
Palabras clave: cerdo, citocinas, PCR cuantitativa, validación

Resumen

La alta sensibilidad y especificidad de la RT-qPCR le hacen el método de elección para la detección precisa de bajas cantidades de ARNm. La mayoría de artículos previamente publicados sobre expresión de citocinas porcinas carecen de información acerca de la validación de la técnica empleada, lo que dificulta su aplicación por nuevos usuarios. El presente estudio se centra en la validación de técnicas de RT-qPCR previamente publicadas para citocinas proinflamatorias (IFN-α, IFN-γ, IL-12p35, IL-12p40 y TNF-α) e inmunomoduladoras (IL-10 y TGF-β). Además se definen las mejores condiciones de amplificación simultánea para qPCR de las citadas citocinas en tejidos porcinos. Los ensayos de RT-qPCR evaluados son sensibles (Eficiencia cercana a 2, coeficiente de correlación mayor de 0.95 y un límite de detección entre 305-100 copias de ARNm), son robustas (coeficiente de variación y factor de discriminación menores de 5 y 3%, respectivamente), y don altamente útiles para el estudio de la respuesta inmune en el cerdo.

Publicado
16-01-2019
Sección
Resúmenes de TFG/TFM