COMPARACIÓN DE DOS MÉTODOS PARA EL AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA C-REACTIVA (CRP) CANINA.

Resumen

La proteína C-reactiva (CRP) es una de las principales proteínas de fase aguda en el perro con un incremento rápido y pronunciado en respuesta a la infección o el daño tisular. Numerosos estudios clínicos y experimentales indican que el análisis de la proteína ayuda en la evaluación, diagnóstico y monitorización de diversas enfermedades inflamatorias. La disponibilidad de CRP canina pura permitiría su empleo como estándar en inmunoensayos de la CRP canina o como inmunógeno de cara a la obtención de anticuerpos anti-CRP canina. En el presente trabajo, se aisló la CRP a partir de suero de fase aguda canino, recurriendo a dos técnicas diferentes: 1. Inmunopurificación, empleando anticuerpos policlonales anti-CRP canina unidos a una matriz de sefarosa activada con bromuro de cianógeno. 2. Cromatografía de afinidad, usando una columna con fosforiletanolamina unida a agarosa a través de enlace epoxi. La pureza de las proteínas obtenidas con las dos metodologías fue valorada mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Ambas técnicas son aptas para purificar la CRP canina, aunque la cromatografía de afinidad proporcionó un mejor rendimiento tanto en su pureza como en la cantidad de CRP obtenida. Además, la cromatografía de afinidad es una alternativa más barata, ya que no precisa el uso de anticuerpos, que normalmente son reactivos de coste elevado.