Caracterización del estado de acoplamiento de las preparaciones de retículo sarcoplásmico e interacción de la Ca²⁺ -ATPasa con vanadato

Resumen

El estado de acoplamiento (relación Ca²⁺ transportado/ATP hidrolizado) de las preparaciones de vesículas de retículo sarcoplásmico se puede determinar por medidas de actividad ATPasa dependiente de calcio por medio del uso de un pHmetro. Dicha relación se ha calculado en unos 2 moles CaCa²⁺/mol ATP, valor que está de acuerdo con los datos de la bibliografía. Se estudia el efecto del ionóforo de calcio X537A (lasalócido) y del detergente no iónico C₁₂E₉ sobre las preparaciones de vesículas de retículo sarcoplásmico. Su acción se traduce en un aumento de la actividad ATPasa dependiente de calcio como consecuencia de que inducen un aumento de la permeabilidad de la membrana al Ca²⁺ ,permaneciendo inalterada la ATPasa basal (independiente de calcio). Se describe un método de desacoplamiento de las preparaciones de vesículas de retículo sarcoplásmico, por tratamiento con EGTA a 37° C. Dicho desacoplamiento produce un significativo aumento de la actividad ATPasa dependiente de calcio no afectando a la actividad ATPasa basal. Se han utilizado preparaciones de ATPasa nativa, desacoplada por tratamiento con EGTA y purificada con detergentes (octilglucósido o colato), para estudiar la interacción de los iones vanadato con el enzima. La constante de disociación del complejo enzima-vanadato depende de la historia previa del enzima y, por lo tanto, se ha visto que son diferentes para las diferentes preparaciones mencionadas anteriormente. Se ha observado que la interacción del vanadato con la Ca²⁺ -ATPasa es un proceso lento, presentándose un proceso histerético cuando se ensaya actividad ATPasa, de vesículas preincubadas con vanadato, en presencia de los sustratos Ca²⁺ y ATP.