CUANTIFICACIÓN DE LAS ISOENZIMAS DE LA PEROXIDASA DE ALTRAMUZ POR DENSITOMETRÍA

Resumen

La formación del producto final de la oxidación de la benzidina («benzidine-brown») por las isoenzimas de la peroxidasa de altramuz separadas por isoelectroenfoque, se utilizó para cuantificar las actividades enzimáticas de cada una de las isoenzimas en un mismo gel. Se encontraron como condiciones de reacción más adecuadas, el uso de tiempos de reacción de 3 h, concentraciones de H₂O₂ del orden de 1 mM, y concentraciones de benzidina a saturación en tampones de pH 5.0. Bajo estas condiciones, la actividad de cada isoperoxidasa puede ser cuantificada como formación (y/o acumulación) de dicho producto en el estado estacionario de la reacción, siendo éste medido como área de cada pico registrado por barrido densitométrico a 460 nm. La validez de este método densitométrico para la cuantificación de las isoenzimas de la peroxidasa de altramuz, está apoyada por la existencia de una relación lineal entre la cantidad total de actividad peroxidasa depositada sobre el gel, y el área correspondiente a cada pico de isoperoxidasa separada por isoelectroenfoque.